显微测微尺及其使用

一、显微测微尺及其使用 

(一)认识显微测微尺 

       显微测微尺是在显微镜下测量生物细微结构的测微工具，通常用它测量细胞各部分的大小、厚薄和面积。 

显微测微尺（见下图）包括目镜测微尺（目尺）和物镜测微尺（台尺），测量时须将其配合使用方可达到测量目的。

      目镜测微尺(直线式)为一圆形玻片,直径为20—21mm，玻片中央有一横线刻有大小格的等距离线。

      物镜测微尺为一特制的玻片，中央圆圈内有一1mm长分为100个等距小格的刻线，每一小格即10μm。 

（二）使用方法 

用目尺来测量细胞大小时，因为它的刻度没有具体长度，所以必须先用台尺核实目尺每一格的长度。具体方法如下：

（1）从显微镜上取下目镜，卸下目镜的上部透镜，将目尺轻轻地加在光圈板上（注意别放倒了），再旋上目镜的上透镜。

（2）将台尺的刻度面向上，放在镜台上夹好，调节焦距，使台尺刻度清晰可见。

（3）细心移动台尺和转动目尺，使两尺平行,并使左边的一直线重合。然后由左向右找出两尺的另一重合的直线（如下图所示）。

（4）记录下两条重合线间目尺和台尺的格数，按下列公式，计算出目尺每格等于多少um：

目尺每格的长度（µm）

     ＝(两重合线间台尺的格数 / 目尺的格数)×10

例如右图台尺一格等于目尺5格，

目尺每格长度＝1/5×10µm＝2µm 

（三）显微测微尺的应用 

显微测微尺是用来测量生物细微结构的测微工具。

       直线式测微尺通常用来测量细胞及各部分大小。如测定洋葱鳞片叶表皮细胞、酵母、花粉、孢子、孢子囊、单细胞藻类的大小（长度和宽度）。

       网格式测微尺还可以用来测量面积或计数。 

二、血球计数板的使用 

血球计数板的构造 

      血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有两个计数室。每个计数室划分出9个大方格（见下图），每格面积1mm2，加盖玻片后的深度为0.1mm。因此，每大方格容积为0.1mm3。另外，中央大方格以双线等分为25个中方格。每个中方格又分16个小方格，供细胞计数用。 

                                  计  数  方  法

         首先用吸管吸取少许稀释一定倍数的（稀释度为每小格5—10个细胞为宜）单细胞悬液，从盖片端滴一小滴（不宜过多），液体自行向内渗入，静置数分钟后，再放在微镜下观察计数。一般选取计数室内四个角及中央五个中方格（80小方格）计数，若细胞位于小方格的线上，应遵循“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则，以减少误差。计数应重复3次，取其平均值。由于菌液处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看得见，因此必须不断调节细螺旋，才能找到全部菌体。数完毕后，依下式计算：

       每1mL悬液细胞数＝80个小方格细胞总数 / 80

         ×400×10000×稀释倍数 

课本实验：

材料：5%新鲜酵母液（或已经培养一至数天的酵母液）

计数方法：

      用已灭菌的滴管吸取培养液，滴一滴在血球计数板上，盖上盖玻片，在显微镜下进行镜检。至少数300个细胞。用细胞除以这些细胞所分布的方格数，即每个方格的平均细胞数。

     每毫升细胞总数 == 平均细胞数 × 250000